Посев обработанного материала производят в 3 или 6 пробирок с различными питательными средами, чаще используют плотные яичные среды Левенштейна — Иенсена, Петраньяни, Гельбера.
Применяют также безаспарагиновую среду № 2 и «Новую». Для ускорения роста микобактерии ведутся разработки полужидких сред. В качестве стандартной среды Всемирной организацией здравоохранения рекомендована среда Левенштейна — Пенсена, которая обладает высокой чувствительностью. Размножение микобактерии и образование колоний происходит медленно, заметный для глаза рост колоний появляется через 2 … 4 нед, а часто лишь через 2 … 3 мес, поэтому посевы длительно выдерживают в термостате при температуре 37 … 38 °С.
Для ммкобактерий туберкулеза человеческого и бычьего вида характерно образование плотных морщинистых колоний кремового цвета. Выросшую культуру микроскопируют и дифференцируют по ряду признаков. На среде с натрия салицилатом не растут М. tuberculosis и М. bovis, другие микобактерии дают пышный рост. Положительный ниациновый тест отличает М. tuberculosis от М. bovis.
Для определения других видов микобактерии изучают скорость их роста на яичных и агаровых средах, образование пигмента, рост при разных температурах и применяют различные биохимические тесты.
Приобретает большое значение количественная оценка обсемененности исследуемого материала, что позволяет оценить тяжесть процесса, его прогноз и выбор метода лечения. Она производится при сопоставлении данных бактериоскопического метода и выделения культуры микобактерии.
Для этого интенсивность роста микобактерии на питательных средах оценивают по 4-балльной системе: «+» — меньше 20 колоний, « + + » — 20 … 50 колоний, « + + + » — более 50 колоний, « + + + + » — сплошной рост.
При проведении обычного бактериологического исследования не удается выявление L-форм микобактерии туберкулеза, поэтому разработан специальный метод их выделения. Параллельно с высевом на яичные среды после предварительной обработки материала производят посев осадка в 3 … 5 пробирках с полужидкой агаровой смесью (на основе среды Школьниковой), содержащей 20 % сахарозы, 10 % сыворотки крупного рогатого скота и
100 ЕД/мл пенициллина или стрептомицина для подавления неспецифической микрофлоры. Через 1 … 2 мес приготавливают препараты с применением фазово-контрастной микроскопии, L-формы удается выделить почти в 20 % случаев.
При проведении бактериологического исследования частота получения культур микобактерии туберкулеза от больных детей во многом зависит от фазы туберкулезного процесса. Так, по данным некоторых авторов, в фазе распада у детей и подростков, больных туберкулезом легких, частота выделения микобактерии в доантибактериальном периоде составляла 46 … 68 %, в фазе инфильтрации — 13 … 16 % и в фазе рассасывания — 4 … 8 %.
Применение антибактериальной терапии привело к снижению высеваемости микобактерии (14 против 46 %). У детей раннего возраста при активном туберкулезе частота обнаружения микобактерии составляет лишь 10 %. Несколько выше результаты при исследовании промывных вод бронхов. Отмечены значительная высеваемость от больных детей атипичных, пигментных микобактерии и увеличение их выделения в процессе лечения больных.
«Туберкулёз у детей и подростков», Е.Н. Янченко